DWD-1 자외선 검출기(고성능 듀얼 빔 듀얼 파장) 내장 데이터 처리

파장 범위: 254nm, 280nm (동시 검출), 254nm, 280nm-400nm 스펙트럼 사이에서 두 파장을 동시에 검출합니다.

*DWD-1 장비 특징

단백질 280nm/254nm 이중 파장 측정:

단백질 분자에는 멍에를 함께 하는 카제인, 트립토판 등 방향족 아미노산이 함유되어 있다.그들은 자외선을 흡수하는 성질을 가지고 있으며, 그 흡수 고봉은 280nm 파장에 있으며, 이 파장 내 흡수봉의 광밀도 값은 그 농도와 정비례 관계가 있기 때문에 단백질의 정성, 정량 측정의 근거로 삼을 수 있다. 따라서 280nm 지점의 자외선 흡수법은 일반적으로 계층 분석 시스템에서 단백질 농도의 연속 모니터링에 사용된다.그러나 각종 단백질의 타이로신과 트립토판의 함량이 다르기 때문에 정확하게 정량하려면 단백질을 측정해야 하는 순품을 기준으로 비교하거나 이미 그 소광계수를 알고 참고해야 한다.또 적지 않은 비단백질 물질은 280nm 파장에서도 -정흡수 능력이 있어 방해가 발생할 수 있다.그 중에서도 특히 핵산 (퓨린과 피리딘) 의 영향이 더 심각하다.280nm에서는 단백질보다 10배(g당) 강한 흡수를 보이지만 핵산은 254nm에서 더 강하게 흡수돼 254nm 부근에서 가장 많이 흡수된다.핵산 254nm 지점의 소광계수는 280nm 지점의 2배,

반면 단백질은 반대로 280nm의 자외선 흡수치가 254nm의 흡수치보다 크다.

보통：

순수 단백질의 빛 흡수 비율: A280/A254"1.8

순수 핵산의 빛 흡수 비율: A280/A254"0.5

따라서 단백질 용액에 핵산이 동시에 존재할 때 (생물 체계는 대부분 그렇다), OD254nm와 OD280nm를 동시에 측정해야 한다.그리고 두 파장의 흡수도 비율에 따라 경험적 공식 교정을 통해 핵산의 영향을 없애기 위해 단백질의 실제 함량을 추산한다.

단백질 농도 = 1.45×A280-0.74×A254(mg/ml)

이 경험 공식은 농도 비례가 다른 단백질 (효모 올레핀화 효소) 과 핵산 (효모 핵산) 의 혼합액으로 알려진 일련의 데이터를 통해 만들어진다.